Objetivo: Efetuar as técnicas básicas de semeadura de material para isolamento de germes.
Princípio: Uma população microbiana, sob condições naturais, contém muitas espécies diferentes. Os microbiologistas devem ser capazes de isolar, enumerar, e identificar os microrganismos em uma amostra, para então classificá-los e caracterizá-los.
Os microrganismos na natureza normalmente existem em cultura mistas, com muitas espécies diferentes ocupando o mesmo ambiente.
Ao ajustar as características de um microrganismo, ele deve estar em cultura pura, ou seja, em que todas as células na população são iguais no sentido de que elas se originaram de uma mesma célula parental.
Em laboratório, os microrganismos são cultivados ou desenvolvidos em material nutriente denominado meio de cultura. O tipo de meio utilizado depende de vários fatores:
- Observações sobre a origem do material a ser monitorado
- A espécie que se imagina estar presente nesta amostra
- As importâncias nutricionais dos organismos
Material: Alça de platina, meio sólido em placa, tubos contendo 10ml de meio Mueller-Hinton, pipetas de 1ml, tubos com 4,5ml de salina estéril, alça de Drigalsky, bico de Bunsen, swab esteril, galeria para tubos de ensaio, placas de Petri estéreis, becker de 100ml com álcool, estufa a 37ºC, banhomaria a 100ºC, material biológico (saliva, sec. nasal, sec.ouvido, sec.orofaringe, fezes, urina, etc.)
Métodos
Técnica de Esgotamento: A mais usada para isolamento de germes em meio sólido (ágar sangue, ágar EMB, etc ), onde se utiliza uma alça de platina, previamente flambada e esfriada.
- Com a alça de platina, tocar suavemente na amostra.
- Atravessar a alça sobre o meio de cultura em movimento de zigue-zague sem sobrepor as linhas e sem recarregar a Alça1.
- Incubar as placas a 37ºC por 24 a 48 horas
- Ter cuidado para não ferir o meio de cultura.
Espalhamento “Pour Plate”: Fazer uma prévia diluição da amostra e colocar em uma placa de Petri vazia e em seguida derramar o meio sobre a amostra e misturar para homogeneizar a amostra diluída com o meio de cultura. Técnica:
- Formar diluição seriada da amostra, ex. 1/10, 1/100 e 1/1000.
- Colocar 1 ml de cada diluição em uma placa de Petri estéril
- Fundir 10 ml de meio sólido e resfriar a 65ºC
- Derramar sobre a amostra na placa e aplicar movimentos suaves na placa para misturar a amostra com o meio;
- Esperar o meio, solidificar novamente e incubar as placas a 37ºC por 24 a 48 horas.
Espalhamento Pos Plate: Espalhar a amostra diluída ou não sobre o meio com auxilio da alça de Drigalsky, para obter colônias isoladas.
Interpretação: Observar as colônias isoladas, caracterizadas pela formação de pontos
isolados sobre o meio de cultura, após a incubação.
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