Coloração de Gram

Objetivo: Observar formas, disposição e comportamento tintorial das bactérias. Distinguir bactérias Gram-positivas das Gram-negativas

Princípio: O método de Gram permite classificar as bactérias em dois grandes grupos: as que retêm Violeta de genciana ( Gram-positiva ) e as que não retém o violeta genciana (Gram-negativa). Além do mais, é útil para determinar a forma (cocos e bacilos), e o arranjo das células após a divisão celular ( em forma de cacho, cadeias, sarcina etc., ).

As células bacterianas são caracterizadas morfologicamente:

1. Comportamento tintorial: Gram-positiva ou Gram-negativa

2. Forma: cocos (esféricos), bacilos (cilíndricos) e espirilos (espiralados)

3. Arranjo: Disposição das células entre si. Os cocos podem estar isolados, aos pares (diplococos), agrupados em cachos (estafilococos), em cadeia (estreptococos). Os bacilos e espirilos se apresentam em geral como células isoladas porém, ocasionalmente pode-se observar bacilos aos pares (diplobacilos) ou em cadeia ( estreptobacilos ).

Quanto ao tamanho, as células bacterianas são sempre de dimensões microscópicas, o diâmetro da maioria delas varia de 0,2 a 1,5 m e comprimento de 1 a 6 m.

Material: Reagentes de Gram: sol. cristal-violeta 2%; sol. aquosa de iodo (Lugol); mistura álcool-acetona; sol. alcoólica de safranina1 , Lâminas: Suporte para lâminas; alça de platina; Bico de Bunsen; Microscópio; Óleo de Imersão.

Método:

1. Cobrir a área do esfregaço com a solução de cristal-violeta por cerca de 1min;

2. Lavar com água corrente e escorrer o excesso de água;

3. Cobrir a área do esfregaço com a solução de iodo durante cerca de 1 minuto;

4. Descorar a lâmina com a mistura álcool-acetona, até que o solvente escorra incolor;

5. Cobrir o esfregaço com a solução de safranina1 por cerca de 30 segundos;

6. Lavar com água corrente;

7. Deixar secar ao ar.

Interpretação: Bactérias Gram-positivas retém o cristal-violeta e se apresentam com coloração violeta, enquanto as Gram-negativas são descoradas pelo álcool-acetona, sendo, portanto, coradas pela safranina e se apresentam róseas.

PASSO-A-PASSO NA PRÁTICA:

Visualização da amostra coletada