Coloração de Ziehl-Neesen

Objetivos: Elaborar uma coloração para identificar os Bacilos Álcool-Ácido-Resistentes (BAAR) em material biológico, essencial no diagnóstico laboratorial de doenças infecciosas causadas por Micobactérias, tais como tuberculose e Hanseníase.

Princípios: Existem bactérias que são resistentes à coloração, porém quando coradas, resistem fortemente à descoloração, mesmo quando submetidas a ácidos fortemente diluídos e ao álcool absoluto, sendo assim denominadas de bacilos álcool-ácido-resistentes (BAAR), essa característica é exemplificada por conta do alto teor de lipídeos estruturais na parede celular, que corrobora na hidrofobicidade, dificultando a ação dos corantes aquosos. Um exemplo de ácido graxo altamente presente na parede celular dessas bactérias é o ácido micólico.

Na técnica de Ziehl-Neelsen, após o processo de coloração da amostra, a fucsina de Ziehl irá corar todos os elementos celulares de vermelho, porém após a descoloração com o álcool, somente os bacilos álcool-ácidos-resistente irão continuar preservando a cor vermelha, os demais elementos celulares na amostra serão descoradas.

Então, para podermos visualizar os outros elementos celulares (descorados) na amostra, deve-se utilizar azul de metileno, que dará um contraste, deixando os elementos celulares em azul e os bacilos álcool-ácidos-resistentes continuarão em vermelho.

Material: Laminas, swab estéril, solução de fucsina fenicada, solução de azul de metileno, solução de HCl a 5% em álcool, lamparina à álcool, fósforo, álcool comercial.

Observação: houve a substituição do swab estéril por cotonete e a lamparina à álcool por vela comum.

A amostra biológica coletada foi a do professor Dr. Luis Carlos.

Método

1. Fixar a lâmina com o calor;

2. Cobrir o esfregaço com fucsina fenicada;

3. Aquecer em chama até emitir vapores; Iniciar a contagem de cinco minutos.

4. Lavar suavemente a lâmina em água;

5. Colocar álcool-ácido clorídrico, até que o corante não se desprenda mais (cerca de dois minutos);

6. Lavar a lâmina com água;

7. Cobrir o esfregaço com azul-de-metileno (durante trinta segundos);

8. Lavar a lâmina com água;

9. Deixar secar e observar ao microscópio com a objetiva de imersão.

PASSO-A-PASSO NA PRÁTICA:

Visualização da amostra coletada